پروتکل ساخت محیط کشت محیط کشت LAM آگار
برای ساخت محیط کشت LAM Agar (محیط کشت آگار با ترکیبات خاص برای شناسایی و کشت میکروارگانیسم‌ها)، شما نیاز به مواد شیمیایی مشخص و دستورالعمل‌های دقیق دارید. در اینجا یک پروتکل کلی برای ساخت محیط کشت LAM Agar ارائه می‌شود که میتوانید بر اساس نیاز خود آن را تنظیم کنید.
مواد اولیه مورد نیاز:
- آگار: ماده اصلی برای تهیه ژل و ایجاد ساختار محیط کشت.
- پپتون‌ها: برای تأمین منابع غذایی (پروتئین‌ها و آمینواسیدها) برای رشد میکروارگانیسم‌ها.
- نمک‌ها: مانند کلرید سدیم (NaCl) برای حفظ فشار اسمزی محیط.
- گلوکز (C₆H₁₂O₆): به عنوان منبع انرژی برای میکروارگانیسم‌ها.
- فنیل‌الانین: برای شناسایی ویژگی‌های خاص باکتری‌ها (در صورت نیاز).
- آب مقطر: برای حل کردن مواد و آماده‌سازی محلول.
- محلول‌های بافر: برای تنظیم pH محیط.
- مواد افزودنی (اختیاری): مثل رنگ‌ها و مواد شیمیایی خاص برای شناسایی ویژگی‌های خاص میکروارگانیسم‌ها.
ابزار مورد نیاز:
- وزنه و پیمانه: برای اندازه‌گیری دقیق مواد.
- بشر یا بالن: برای مخلوط کردن مواد.
- بخاری یا حمام آب: برای ذوب کردن آگار.
- پیپت و استوانه مدرج: برای اندازه‌گیری دقیق مایعات.
- استریلیزر (اتوکلاو): برای استریل کردن محیط کشت.
- ظروف پتری: برای ریختن محیط کشت استریل‌شده.
پروتکل ساخت LAM Agar:
مرحله 1: تهیه محلول پایه
- آب مقطر: 1000 میلی‌لیتر آب مقطر را در یک بالن بزرگ بریزید.
- پپتون: 10 گرم پپتون (برای تأمین پروتئین‌های مورد نیاز میکروارگانیسم‌ها) اضافه کنید.
- گلوکز: 5 گرم گلوکز به محلول اضافه کنید. گلوکز به عنوان منبع انرژی برای باکتری‌ها عمل می‌کند.
- نمک‌ها:
- 5 گرم NaCl (کلرید سدیم) به محلول اضافه کنید تا فشار اسمزی محیط حفظ شود.
- محلول بافر: اگر نیاز است که pH محیط کشت در حدود 7 نگه داشته شود، به محیط یک بافر مناسب (مثلاً فسفات) اضافه کنید.
- پتاسیم دی هیدروژن فسفات (K₂HPO₄): 0.5 گرم برای حفظ pH مناسب.
- مقدار pH: pH محیط کشت باید بین 6.8 تا 7.2 باشد. اگر pH محیط نیاز به اصلاح داشت، میتوانید از اسید یا باز (مثلاً HCl یا NaOH) برای تنظیم آن استفاده کنید.
مرحله 2: افزودن آگار
- به محلول حاصل در مرحله اول، 15 گرم آگار اضافه کنید. این مقدار برای ساخت محیط کشت ژلی مناسب است.
- محلول را به آرامی گرم کنید و از همزدن مداوم استفاده کنید تا آگار به طور کامل در آب حل شود. این مرحله ممکن است به مدت 15 تا 20 دقیقه طول بکشد.
- هنگامی که آگار کاملاً حل شد و محلول به یک حالت شفاف رسید، آن را از حرارت بردارید.
مرحله 3: استریل‌سازی
- محیط کشت را در یک اتوکلاو قرار دهید و به مدت 15 تا 20 دقیقه در دمای 121 درجه سانتی‌گراد استریل کنید.
- پس از استریل‌سازی، اجازه دهید محیط کشت کمی سرد شود، اما هنوز روان و در حالت مایع باشد.
مرحله 4: ریختن در ظروف پتری
- هنگامی که محیط کشت در دمای حدود 50 درجه سانتی‌گراد قرار دارد، آن را در ظروف پتری استریل شده بریزید.
- سطح محیط کشت را صاف کنید تا ضخامت آن یکسان باشد.
- درب ظروف پتری را ببندید و اجازه دهید محیط کشت کاملاً در دمای محیط سفت و ژل شود.
مرحله 5: نگهداری و استفاده
- محیط‌های کشت آماده شده باید در دمای 4 درجه سانتی‌گراد (یخچال) نگهداری شوند تا از رشد ناخواسته میکروارگانیسم‌ها جلوگیری شود.
- زمانی که نیاز به استفاده از محیط کشت دارید، ظرف پتری را برداشته و اجازه دهید به دمای اتاق برسد.
- از محیط کشت برای کشت میکروارگانیسم‌ها استفاده کنید.
نکات مهم:
- آب مقطر: از آب مقطر استفاده کنید تا از هرگونه آلودگی یا مواد اضافی جلوگیری شود.
- استریل‌سازی: اطمینان حاصل کنید که تمامی ابزارها و ظروف مورد استفاده استریل شده باشند.
- رنگ و ویژگی‌های شیمیایی: اگر قصد دارید محیط کشت را برای شناسایی ویژگی‌های خاص میکروارگانیسم‌ها (مثل تغییر رنگ) اصلاح کنید، ممکن است به افزودن رنگ‌ها یا ترکیبات خاص نیاز باشد.
- تعداد نمونه‌ها: حتماً تعداد ظروف پتری را با توجه به نیاز خود تنظیم کنید.
این پروتکل به شما کمک می‌کند که محیط کشت LAM Agar را در آزمایشگاه خود تهیه کرده و از آن برای شناسایی و کشت میکروارگانیسم‌ها استفاده کنید.
